Zelldifferenzierung

Für die panoptische Färbung nach Pappenheim wurde von der Deutschen Gesellschaft für Hämatologie und Onkologie ein Standard festgelegt. Zytochemische Färbeverfahren werden zur Charakterisierung von Blut- und Knochenmarkzellen eingesetzt. So etwa die Myeloperoxidase, die das Leitenzym der Granulopoese ist und somit die wichtigste Methode zur Differenzierung akuter myeloischer und akuter lymphatischer Leukämien darstellt. In einem gewissen Umfang werden weitere Färbeverfahren wie die PAS, die Esterase und die saure Phosphatase zur hämatologischen Diagnostik eingesetzt. Die Berliner-Blau-Färbung dient im Wesentlich zur Abklärung einer Anämie, zur Darstellung von extrazellulärem und intrazellulärem Eisen sowie der Darstellung von Ringsideroblasten, ein Dysplasiezeichen der Erythropoese.

Was passiert nun bei der Frage, ob beim Patienten ein ZNS-Befall im Rahmen seiner hämatologischen Erkrankung vorliegt oder eine Meningeosis, maligne Zellen oder Tumorzellen im Liquor? Die Diagnosestellung eines ZNS-Befalls erfordert bei diesen Patienten eine hohe Aufmerksamkeit, da die neurologischen Symptome (zum Beispiel Erbrechen, Taubheitsgefühle, Doppelbilder, Verwirrtheit) sehr unspezifisch sein können. Gleichzeitig kommen die Erkrankung selbst, die Nebenwirkung einer Chemotherapie oder einer immunsuppressiven Therapie als Auslöser in Frage. Lymphome und Leukämien, vor allem lymphatische und in geringerem Ausmaß auch myeloische Leukämien, können zu Ansiedlungen in die Meningen führen. Die Artdiagnose wird normalerweise aus dem peripheren Blut, dem Knochenmark oder dem Lymphknoten gestellt und ist zum Zeitpunkt der Diagnose einer meningealen Tumoransiedlung meist schon bekannt.

Bei dem Verdacht auf eine akute lymphatische Leukämie ist bei Erstdiagnose neben der Durchführung einer Kochenmarkuntersuchung eine Liquorpunktion obligatorisch. Statistisch gesehen kommt es bei etwa fünf bis zehn Prozent der ALL-Patienten zu einem ZNS-Befall. Das Zellbild im Liquor ist monomorph und besteht überwiegend aus Tumorzellen, die sich morphologisch nicht von denen der Peripherie unterscheiden. Hochmaligne Lymphome und akute Leukämien sind morphologisch meist gut erkennbar. Die selten im Liquor anzutreffenden niedrig-malignen Lymphome können zytomorphologisch meist nicht von gutartigen Zellen unterschieden werden.

Zelldifferenzierung

Für die panoptische Färbung nach Pappenheim wurde von der Deutschen Gesellschaft für Hämatologie und Onkologie ein Standard festgelegt. Zytochemische Färbeverfahren werden zur Charakterisierung von Blut- und Knochenmarkzellen eingesetzt. So etwa die Myeloperoxidase, die das Leitenzym der Granulopoese ist und somit die wichtigste Methode zur Differenzierung akuter myeloischer und akuter lymphatischer Leukämien darstellt. In einem gewissen Umfang werden weitere Färbeverfahren wie die PAS, die Esterase und die saure Phosphatase zur hämatologischen Diagnostik eingesetzt. Die Berliner-Blau-Färbung dient im Wesentlich zur Abklärung einer Anämie, zur Darstellung von extrazellulärem und intrazellulärem Eisen sowie der Darstellung von Ringsideroblasten, ein Dysplasiezeichen der Erythropoese.

Was passiert nun bei der Frage, ob beim Patienten ein ZNS-Befall im Rahmen seiner hämatologischen Erkrankung vorliegt oder eine Meningeosis, maligne Zellen oder Tumorzellen im Liquor? Die Diagnosestellung eines ZNS-Befalls erfordert bei diesen Patienten eine hohe Aufmerksamkeit, da die neurologischen Symptome (zum Beispiel Erbrechen, Taubheitsgefühle, Doppelbilder, Verwirrtheit) sehr unspezifisch sein können. Gleichzeitig kommen die Erkrankung selbst, die Nebenwirkung einer Chemotherapie oder einer immunsuppressiven Therapie als Auslöser in Frage. Lymphome und Leukämien, vor allem lymphatische und in geringerem Ausmaß auch myeloische Leukämien, können zu Ansiedlungen in die Meningen führen. Die Artdiagnose wird normalerweise aus dem peripheren Blut, dem Knochenmark oder dem Lymphknoten gestellt und ist zum Zeitpunkt der Diagnose einer meningealen Tumoransiedlung meist schon bekannt.

Bei dem Verdacht auf eine akute lymphatische Leukämie ist bei Erstdiagnose neben der Durchführung einer Kochenmarkuntersuchung eine Liquorpunktion obligatorisch. Statistisch gesehen kommt es bei etwa fünf bis zehn Prozent der ALL-Patienten zu einem ZNS-Befall. Das Zellbild im Liquor ist monomorph und besteht überwiegend aus Tumorzellen, die sich morphologisch nicht von denen der Peripherie unterscheiden. Hochmaligne Lymphome und akute Leukämien sind morphologisch meist gut erkennbar. Die selten im Liquor anzutreffenden niedrig-malignen Lymphome können zytomorphologisch meist nicht von gutartigen Zellen unterschieden werden.

Untersuchungsmaterial: Liquor

Liquor als Untersuchungsmaterial erfordert durchgehend besondere Aufmerksamkeit, sowohl bei der Vorbereitung und Durchführung der Probengewinnung als auch beim Transport und der anschließenden Labordiagnostik. Nach Eintreffen des Liquors im Labor geht es um eine möglichst schnelle und sorgfältige Bearbeitung durch das Laborpersonal. Liquor ist ein Material, das nur in begrenzten Mengen abgenommen werden kann. Die Labordiagnostik erfordert im Schnitt fünf bis zehn Milliliter. Die ärztliche Laboranforderung bestimmt die Auswahl der Parameter, die für eine gezielte Diagnostik erforderlich sind.

Der Liquor sollte in zwei bis vier Polypropylenröhrchen (je nach Anforderung) ohne Konservierungszusatz aufgefangen werden. Das erste Röhrchen ist für die chemischen Parameter Eiweiß, Glukose und Lactat, das zweite für die Mikrobiologie, das dritte für Zellzählung und Zelldifferenzierung, das vierte für weitere Untersuchungen. Vorausgesetzt, dass der Liquor unmittelbar nach der Abnahme und unter geeigneten Transportbedingungen im Labor eingetroffen ist, gilt es, unverzüglich die Zellzahl zu bestimmen und Präparate für die Liquorzytologie anzufertigen. Mitunter wird ein erlaubtes Zeitfenster von ein bis zwei Stunden zwischen der Liquorgewinnung und der Zellzählung angegeben, doch können die Zellen, speziell die neutrophilen Granulozyten, bereits innerhalb ersten Stunde lysieren, was damit den Aussagegehalt der Zellzählung verfälschen kann.

Liquor als Untersuchungsmaterial erfordert im gesamten Prozess eine besondere Aufmerksamkeit

Bestimmung der Zellzahl: 

Vor der Zellzählung erfolgt eine makroskopische Beurteilung des Liquors. Steht keine automatisier-te Methode wie Zellzählung am Blutbildanalyser mit einer BF-Applikation der XN-Serie zur Verfügung, wird die Zellzahl mikroskopisch in der Fuchs- Rosenthal-Kammer ermittelt.

Normalwerte:

•    Erwachsene: Leukozyten < 5 /μl, keine Erythrozyten
•    Neugeborene (bis 3. Monat): Leukozyten < 15 /μl, Erythrozyten < 500 /μl